TRIAGEM NEONATAL DE IMUNODEFICIÊNCIAS GRAVES COMBINADAS POR MEIO DE TRECS E KRECS: SEGUNDO ESTUDO PILOTO NO BRASIL / NEWBORN SCREENING FOR SEVERE COMBINED IMMUNODEFICIENCIES USING TRECS AND KRECS: SECOND PILOT STUDY IN BRAZIL

RESUMO Objetivo: Validar a quantificação de T-cell receptor excision circles (TRECs) e kappa-deleting recombination circles (KRECs) por reação em cadeia de polimerase (polymerase chain reaction, PCR) em tempo real (qRT-PCR), para triagem neonatal de imunodeficiências primárias que cursam com defeitos nas células T e/ou B no Brasil. Métodos: Amostras de sangue de recém-nascidos (RN) e controles foram coletadas em papel-filtro. O DNA foi extraído e os TRECs e KRECs foram quantificados por reação duplex de qRT-PCR. O valor de corte foi determinado pela análise de Receiver Operating Characteristics Curve, utilizando-se o programa Statistical Package for the Social Sciences (SSPS) (IBM®, Armonk, NY, EUA). Resultados: 6.881 amostras de RN foram analisadas quanto à concentração de TRECs e KRECs. Os valores de TRECs variaram entre 1 e 1.006 TRECs/µL, com média e mediana de 160 e 139 TRECs/µL, respectivamente. Três amostras de pacientes diagnosticados com imunodeficiência grave combinada (severe combined immunodeficiency, SCID) apresentaram valores de TRECs abaixo de 4/µL e um paciente com Síndrome de DiGeorge apresentou TRECs indetectáveis. Os valores de KRECs encontraram-se entre 10 e 1.097 KRECs/µL, com média e mediana de 130 e 108 KRECs/µL, e quatro pacientes com diagnóstico de agamaglobulinemia tiveram resultados abaixo de 4 KRECs/µL. Os valores de corte encontrados foram 15 TRECs/µL e 14 KRECs/µL, e foram estabelecidos de acordo com a análise da Receiver Operating Characteristics Curve, com sensibilidade de 100% para detecção de SCID e agamaglobulinemia, respectivamente. Conclusões: A quantificação de TRECs e KRECs foi capaz de diagnosticar crianças com linfopenias T e/ou B em nosso estudo, validando a técnica e dando o primeiro passo para a implementação da triagem neonatal em grande escala no Brasil.

ABSTRACT Objective: To validate the quantification of T-cell receptor excision circles (TRECs) and kappa-deleting recombination excision circles (KRECs) by real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) for newborn screening of primary immunodeficiencies with defects in T and/or B cells in Brazil. Methods: Blood samples from newborns and controls were collected on filter paper. DNA was extracted and TRECs, and KRECs were quantified by a duplex real-time PCR. The cutoff values were determined by receiver operating characteristic curve analysis using SPSS software (IBM®, Armonk, NY, USA). Results: Around 6,881 samples from newborns were collected and TRECs and KRECs were quantified. The TRECs values ranged between 1 and 1,006 TRECs/µL, with mean and median of 160 and 139 TRECs/µL, respectively. Three samples from patients with severe combined immunodeficiency (SCID) showed TRECs below 4/µL and a patient with DiGeorge syndrome showed undetectable TRECs. KRECs values ranged from 10 to 1,097 KRECs/µL, with mean and median of 130 and 108 KRECs/µL. Four patients with agammaglobulinemia had results below 4 KRECs/µL. The cutoff values were 15 TRECs/µL and 14 KRECs/µL and were established according to the receiver operating characteristic curve analysis, with 100% sensitivity for SCID and agammaglobulinemia detection, respectively. Conclusions: Quantification of TRECs and KRECs was able to diagnose children with T- and/or B-cell lymphopenia in our study, which validated the technique in Brazil and enabled us to implement the newborn screening program for SCID and agammaglobulinemia.

Respiratory infections in children up to two years of age on prophylaxis with palivizumab / Infecciones respiratorias en niños menores de dos años de edad sometidos a profilaxis con palivizumabe / Infecções respiratórias em crianças menores de dois anos de idade submetidas a profilaxia com palivizumabe

To identify the viruses involved in acute respiratory tract infections and to analyze the rates of hospitalization and death in children on palivizumab prophylaxis. METHODS: Prospective cohort of 198 infants up to one year old who were born before 29 weeks of gestational age and infants under two years old with hemodynamically unstable cardiopathy or chronic pulmonary disease who received prophylactic palivizumab against severe respiratory syncytial virus infections in 2008. During the study period, in each episode of acute respiratory tract infection, nasopharyngeal aspirate was collected to identify respiratory syncytial virus, adenovirus, parainfluenza 1, 2 and 3, influenza A and B by direct immunofluorescence, rhinovirus and metapneumovirus by polymerase chain reaction preceded by reverse transcription. Data regarding hospitalization and deaths were monitored. RESULTS: Among the 198 studied infants, 117 (59.1%) presented acute respiratory tract infections, with a total of 175 episodes. Of the 76 nasopharyngeal aspirates collected during respiratory tract infections, 37 were positive, as follow: rhinovirus (75.7%), respiratory syncytial virus (18.9%), parainfluenza (8.1%), adenovirus 2 (2.7%), metapneumovirus (2.7%) and three samples presented multiple agents. Of the 198 children, 48 (24.4%) were hospitalized: 30 (15.2%) for non-infectious etiology and 18 (9.1%) for respiratory causes. Among these 18 children, one case of respiratory syncytial virus was identified. Two deaths were reported, but respiratory syncytial virus was not identified. CONCLUSIONS: During the prophylaxis period, low frequency of respiratory syncytial virus infections and low rates of hospitalization were observed, suggesting the benefit of palivizumab prophylaxis...

Identificar los virus implicados en los cuadros de infecciones agudas de trato respiratorio y analizar las tasas de internación y de óbito en niños sometidos a la profilaxis con palivizumabe. MÉTODOS: Cohorte prospectiva con 198 niños con menos de un año nacidas antes de 29 semanas de edad gestacional y niños con menos de dos años con cardiopatía hemodinámicamente inestable o enfermedad pulmonar crónica que recibieron palivizumabe para profilaxis contra infecciones graves por el virus sincitial respiratorio, en 2008. En el periodo de estudio, en cada episodio de infección aguda del trato respiratorio, se recogió aspirado de nasofaringe para identificar virus sincitial respiratorio, adenovirus, parainfluenza 1,2 y 3, influenza A y B por técnica del anticuerpo fluorescente directa, rinovirus y metapneumovirus por reacción en cadena de la polimerasa precedida por transcriptasa inversa. Se monitorean internaciones y óbitos en ese grupo. RESULTADOS: De los 198 niños seguidos, 117 (59,1%) presentaron infecciones agudas de trato respiratorio, totalizando 175 episodios. De 76 aspirados de nasofaringe recogidos en la vigencia de infecciones de trato respiratorio, 37 fueron positivos, encontrándose: rinovirus (75,7%), virus sincitial respiratorio (18,9%), parainfluenza (8,1%), adenovirus (2,7%), metapneumovirus (2,7%) y múltiples agentes en tres muestras. De los 198 niños, 48 (24,4%) fueron internados, siendo 30 (15,2%) por etiología no respiratoria y 18 (9,1%) por problemas respiratorios; entre los 18 casos, uno fue por virus sincitial respiratorio. Dos niños evolucionaron a óbito, no habiendo sido identificado el virus sincitial respiratorio. CONCLUSIONES: En la vigencia de profilaxis, se observó frecuencia baja de infecciones por el virus sincitial respiratorio y bajo índice de hospitalizaciones...

Identificar os vírus envolvidos nos quadros de infecções agudas de trato respiratório e analisar as taxas de internação e de óbito em crianças submetidas à profilaxia com palivizumabe. MÉTODOS: Coorte prospectiva com 198 crianças menores de um ano nascidas antes de 29 semanas de idade gestacional e crianças menores de dois anos com cardiopatia hemodinamicamente instável ou doença pulmonar crônica que receberam palivizumabe para profilaxia contra infecções graves pelo vírus sincicial respiratório, em 2008. No período do estudo, em cada episódio de infecção aguda do trato respiratório, coletou-se aspirado de nasofaringe para identificar vírus sincicial respiratório, adenovírus, parainfluenza 1, 2 e 3, influenza A e B por imunofluorescência direta, rinovírus e metapneumovírus por reação em cadeia de polimerase precedida de transcriptase reversa. Monitoraram-se internações e óbitos nesse grupo. RESULTADOS: Das 198 crianças acompanhadas, 117 (59,1%) apresentaram infecções agudas de trato respiratório, totalizando 175 episódios. De 76 aspirados de nasofaringe coletados na vigência de infecções do trato respiratório, 37 foram positivos, encontrando-se: rinovírus (75,7%), vírus sincicial respiratório (18,9%), parainfluenza (8,1%), adenovírus (2,7%), metapneumovírus (2,7%) e múltiplos agentes em três amostras. Das 198 crianças, 48 (24,4%) foram internadas, sendo 30 (15,2%) por etiologia não respiratória e 18 (9,1%) por problemas respiratórios; entre os 18 casos, um foi por vírus sincicial respiratório. Duas crianças evoluíram para óbito, não tendo sido identificado o vírus sincicial respiratório...

Reduction of exposure to blood donors in preterm infants submitted to red blood cell transfusions using pediatric satellite packs / Reduccion de la exposicion a donantes de sangre en prematuros sometidos a transfusiones de hematies con uso de bolsas de transferencia pediatrica / Reducao da exposicao a doadores de sangue em prematuros submetidos a transfusoes de hemaciascom uso de bolsas de transferencia pediatricas

OBJECTIVE: In preterm newborn infants transfused with erythrocytes stored up to 28 days, to compare the reduction of blood donor exposure in two groups of infants classified according to birth weight. METHODS: A prospective study was conducted with preterm infants with birth weight <1000g (Group 1) and 1000-1499g (Group 2), born between April, 2008 and December, 2009. Neonates submitted to exchange transfusions, emergency erythrocyte transfusion, or those who died in the first 24 hours of life were excluded. Transfusions were indicated according to the local guideline using pediatric transfusion satellite bags. Demographic and clinical data, besides number of transfusions and donors were assessed. . Logistic regression analysis was performed to determine factors associated with multiple transfusions. RESULTS: 30 and 48 neonates were included in Groups 1 and 2, respectively. The percentage of newborns with more than one erythrocyte transfusion (90 versus 11%), the median number of transfusions (3 versus 1) and the median of blood donors (2 versus 1) were higher in Group 1 (p<0.001), compared to Group 2. Among those with multiple transfusions, 14 (82%) and one (50%) presented 50% reduction in the number of blood donors, respectively in Groups 1 and 2. Factors associated with multiple transfusions were: birth weight <1000g (OR 11.91; 95%CI 2.14-66.27) and presence of arterial umbilical catheter (OR 8.59; 95%CI 1.94-38.13), adjusted for confounders. CONCLUSIONS: The efficacy of pediatrics satellites bags on blood donor reduction was higher in preterm infants with birth weight <1000g. .

OBJETIVO En prematuros transfundidos con hematíes preservados por hasta 28 días, comparar la reducción de exposición a donantes en dos grupos de pacientes, según el peso al nacer. MÉTODO Se trata de un estudio prospectivo con prematuros con peso al nacer <1000g (Grupo 1) y de 1000-1499g (Grupo 2), nacidos entre abr/2008 a dic/2009. Se excluyeron recién-nacidos sometidos a exsanguineotransfusión, transfusión de emergencia u óbito antes de 24 horas de vida. Las transfusiones fueron indicadas según la rutina del servicio, utilizando bolsas de transferencia pediátrica. Se analizaron datos demográficos, clínicos y número de transfusiones y donantes. Variables categóricas fueron comparadas por la prueba de chi-cuadrado y numéricas por la prueba t o Mann-Whitney. Se utilizó regresión logística para análisis de factores asociados a las múltiples transfusiones. RESULTADOS: Se incluyeron 30 prematuros en el Grupo 1 y 48 en el Grupo 2. El porcentaje de prematuros que recibió más de una transfusión de hematíes (89,5 versus 10,5%), la mediana del número de transfusiones (3 versus 1) y la mediana de donantes (2 versus 1) fue mayor en el Grupo 1, comparado al Grupo 2 (p<0,001). Entre aquellos con transfusiones múltiples, 14 (82,4%) y 1 (50,0%) prematuros presentaron reducción de 50% de donantes respectivamente en los Grupos 1 y 2. Los factores asociados a múltiples transfusiones fueron peso al nacer <1000g (OR 11,91; IC95% 2,14-66,27) y presencia de catéter arterial umbilical (8,59; 1,94-38,13), controlados para variables de confusión. CONCLUSIONES La eficacia de las bolsas de transferencia pediátricas para reducir la exposición a donantes de sangre fue mayor en prematuros con peso al nacer <1000g. .

OBJETIVO Em prematuros transfundidos com hemácias preservadas por até 28 dias, comparar a redução de exposição a doadores em dois grupos de pacientes, de acordo com o peso ao nascer. MÉTODOS Estudo prospectivo de prematuros com peso ao nascer <1000g (Grupo 1) e de 1000-1499g (Grupo 2), nascidos entre abril de 2008 e dezembro de 2009. Excluíram-se os recém-nascidos submetidos a exsanguineotransfusão, transfusão de emergência ou óbito antes de 24 horas de vida. As transfusões foram indicadas conforme rotina do serviço, utilizando-se bolsas de transferência pediátricas. Analisaram-se dados demográficos, clínicos e número de transfusões e doadores. Utilizou-se regressão logística para análise de fatores associados às múltiplas transfusões. RESULTADOS Incluíram-se 30 prematuros no Grupo 1 e 48 no Grupo 2. A porcentagem de prematuros que receberam mais de uma transfusão de hemácias (90 versus 11%), a mediana do número de transfusões (3 versus 1) e mediana de doadores (2 versus 1) foram maiores no Grupo 1, comparado ao Grupo 2 (p<0,001). Entre aqueles com transfusões múltiplas, 14 (82%) e um (50%) prematuros apresentaram redução de 50% de doadores respectivamente nos Grupos 1 e 2. Os fatores associados a múltiplas transfusões foram peso ao nascer <1000g (OR 11,91; IC95% 2,14-66,27) e presença de cateter arterial umbilical (OR 8,59; IC95% 1,94-38,13), controlados para variáveis de confusão. CONCLUSÕES A eficácia das bolsas de transferência pediátricas para reduzir a exposição a doadores de sangue foi maior em prematuros com peso ao nascer <1000g. .

Prevalence and factors associated with thoracic alterations in infants born prematurely / Prevalência e fatores associados às alterações torácicas em lactentes nascidos prematuros

OBJECTIVE: To determine the prevalence of thoracic musculoskeletal alterations and associated factors in infants born prematurely. METHODS: This was a cross sectional study with infants in the first year of age, born prematurely with birth weight < 2,000 g, who were followed up at the Premature Clinic from February, 2007 to December, 2008. Exclusion criteria were: maj or congenital malformations as defined by the Centers for Disease Control and Prevention (CDC), grade III/IV intraventricular hemorrhage, or periventricular leucomalacia. Physical examinations performed independently by two physiotherapists were used to assess shoulder elevation and thoracic retractions. Comparisons between groups were performed using the chi-squared test or Fisher's exact test for categorical variables, and Mann-Whitney's test or Student's t-test were used for continuous variables. Interobserver reliability between the two physiotherapists was assessed by the kappa coefficient. Variables associated with these thoracic musculoskeletal alterations were studied by univariate and multiple logistic analyses. Statistical differences were considered significant when p < 0.05. This study was approved by the ethical committee of the institution, and parents/guardians signed an informed consent. RESULTS: 121 infants with a gestational age of 31.1 ± 2.8 weeks and birth weight of 1,400 ± 338 g were included. Thoracic alterations were detected by Physiotherapist 1 in 81 (66.9%) infants, and in 83 (68.6%) by Physiotherapist 2 (kappa coefficient = 0.77). By multivariate logistic regression analysis, factors associated with thoracic musculoskeletal alterations were: respiratory distress syndrome (odds ratio [OR] = 3.246, 95% confidence interval [CI]: 1.237-8.732), bronchopulmonary dysplasia (OR = 11.138, 95% CI: 1.339-92.621), and low length/age ratio (OR = 4.571, 95% CI: 1.371-15.242). CONCLUSION: The prevalence of thoracic alterations was high in infants born prematurely, and was associated with pulmonary disease and low length/age ratio.

OBJETIVO: Determinar a prevalência e os fatores associados às alterações torácicas musculoesqueléticas em lactentes nascidos prematuros. MÉTODOS: Estudo transversal com lactentes no primeiro ano de vida, nascidos prematuros com peso < 2000 g e acompanhados em um ambulatório de seguimento de prematuros, de fevereiro/2007 a dezembro/2008. Foram excluídas crianças com malformações maiores definidas pelo CDC ou com hemorragia peri-intraventricular grau III/IV ou leucomalácia periventricular. Duas fisioterapeutas realizaram o exame físico, avaliando, de modo independente, a elevação de ombros e as retracões da caixa torácica. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Instituição, sendo solicitada assinatura do Termo de Consentimento pelos pais. As variáveis numéricas foram comparadas pelo teste t ou Mann-Whitney. O grau de concordância entre as avaliações das fisioterapeutas foi obtido pelo coeficiente kappa e as variáveis associadas às alterações torácicas foram estudadas por regressão logística univariada e múltipla. Considerou-se significante p < 0,05. RESULTADOS: Foram estudados 121 lactentes com idade gestacional de 31,1 ± 2,8 semanas e peso ao nascer de 1400 ± 338 g. A fisioterapeuta 1 detectou alterações torácicas em 81 (66,9%) lactentes e a fisioterapeuta 2 em 83 (68,6%) (coeficiente kappa = 0,77). Os fatores associados às alterações musculoesqueléticas foram: síndrome do desconforto respiratório no período neonatal (OR=3,246; IC 95%: 1,237-8,732), ter apresentado displasia broncopulmonar (OR=11,138; IC 95%: 1,339-92,621) e relação comprimento para a idade alterada (OR=4,571; IC 95%: 1,371-15,242). CONCLUSÃO: A prevalência de alterações torácicas foi alta em lactentes nascidos prematuros e associou-se a doença pulmonar no período neonatal e baixa relação comprimento/idade.

Medida da freqüência respiratória e do volume corrente para prever a falha na extubação de recém-nascidos de muito baixo peso em ventilação mecânica / Evaluation of respiratory rate and tidal volume to predict extubation failure in mechanically ventilated very low birth weight infants

OBJETIVO: Verificar se a freqüência respiratória (FR), o volume corrente (VC) e a relação FR/VC poderiam prever a falha na extubação em recém-nascidos de muito baixo peso submetidos à ventilação mecânica. MÉTODOS: Estudo prospectivo, observacional, de recém-nascidos com idade gestacional <37 semanas, peso ao nascer <1.500g, ventilados desde o nascimento por 48 horas a 30 dias. Após a indicação da retirada da ventilação mecânica, o neonato foi colocado em pressão positiva contínua (CPAP) por via traqueal por dez minutos, avaliando-se FR, VC e relação FR/VC por meio de um pneumotacógrafo conectado entre a cânula traqueal e o circuito do ventilador. Em seguida, o recém-nascido foi extubado e colocado em CPAP nasal, considerando-se falha na extubação a necessidade de reintubação em 48 horas. RESULTADOS: Das 35 crianças estudadas, 20 (57 por cento) foram extubadas com sucesso e 15 (43 por cento) necessitaram de reintubação. A FR e a relação FR/VC tenderam a ser maiores no grupo que falhou na extubação; o VC foi similar nos dois grupos. A sensibilidade e a especificidade para falha na extubação foram, respectivamente, 50 e 67 por cento para FR, 40 e 67 por cento para o VC e 40 e 73 por cento para a relação FR/VC. CONCLUSÕES: A FR, o VC e a relação FR/VC apresentaram baixa sensibilidade e especificidade para prever a falha na extubação em recém-nascidos de muito baixo peso.

OBJECTIVE: To verify if respiratory rate (RR), tidal volume (TV) and respiratory rate and tidal volume ratio (RR/TV) could predict extubation failure in very low birth weight infants submitted to mechanical ventilation. METHODS: This prospective observational study enrolled newborn infants with gestational age <37 weeks and birth weight <1,500g, mechanically ventilated from birth during 48 hours to 30 days and thought to be ready for extubation. As soon as the physicians decided for extubation, the neonates received endotracheal continuous positive airway pressure (CPAP) for 10 minutes while spontaneous RR, TV and RR/TV were measured using a fixed-orifice pneumotachograph positioned between the endotracheal tube and the ventilator circuit. Thereafter, the neonates were extubated to nasal CPAP. Extubation failure was defined as the need for reintubation within 48 hours. RESULTS: Of the 35 studied infants, 20 (57 percent) were successfully extubated and 15 (43 percent) required reintubation. RR and RR/TV before extubation had a trend to be higher in unsuccessfully extubated infants. TV was similar in both groups. Sensitivity and specificity of these parameters as predictors of extubation failure were 50 and 67 percent respectively for RR, 40 and 67 percent for TV and 40 and 73 percent for RR/TV. CONCLUSIONS: RR, TV and RR/TV showed low sensitivity and specificity to predict extubation failure in mechanically ventilated very low birth weight infants.

Antibioticoterapia na septicemia neonatal / Antibioticotherapy in the neonate sepsis

Säo discutidos achados clínicos e laboratoriais de 18 recém-nascidos com septicemia. O tratamento antibiótico baseou-se em penicilina associada a amicacina. Discutem-se asepctos imunológicso presdiponentes a infecçöes graves neste grupo etário